- 苗春波;万志刚;孙丙耀;
<正>1 材料与方法1.1 材料供试材料为12个籼稻品种的成熟种子(籽实)。其中,籼小粘、嘉育948、中二软占、湘晚籼1号、遵籼3号、中鉴1006个品种由国家水稻种质资源中期库提供,扬稻6号、扬籼6547、盐恢559、镇恢084、广恢998、明恢86六个品种由江苏太湖农业科学研究所提供。
2009年04期 v.10 22-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 317K] [下载次数：201 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：54 ] [Objective]The aim was to explore technical system of making single transgenic positive cells become colony cells by amplification culture. [Method] Fetal fibroblasts and mammary gland epithelial cells of single goat fetus of pBLM-C1 which specifically expressed human lactoferrin were cloned. Single cell colony of single transfection cell was prepared with 3 concentrations of 0%,50% and 100% conditioned culture media. Transfection cell and non-transfection cell were carried out amplification culture by con-culture,neo gene was as screened gene,genome DNA of transfection cell was detected by PCR method. Chromosome karyotype analysis of single colony cell was tested. [Result] Compared with non-conditioned culture medium,100% conditioned culture medium could greatly increase survived rate of single colony cells (FF: 53.33% vs. 10.00%;MGE: 33.33% vs. 6.67%). Compared with control,con-culture of transfection cell and non-transfection cell could greatly increase rate of transfection cell single colony after amplification culture (FF: 53.33% vs. 10.00%;MGE: 33.33% vs. 6.67%),confluence time of amplification culture was significantly decreased (20-30 d). The result of PCR showed that the colony cell obtained by above method contained hLF target gene. The result of karyotype analysis showed that most cloned cell chromosomes were normal. [Conclusion] The study provides a reliable method for separating transgenic cell,inserting and diagnosing ideal vector,and can save expense and time for transgenic animal production.
2009年04期 v.10 27-30+100页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K] [下载次数：36 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：46 ] - 徐岩;肖艳双;杜金霞;汪洪;郑伟;李营;庞实锋;
<正>1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试材料。白菜型油菜苏州青,市售。1.1.2 菌株及质粒。采用根癌农杆菌LBA4404,该菌株含有植物双元表达载体pCAMBIA1390,油菜油体基因与bFGF的融合基因已整合到该载体上,该融合基因由油菜油体基因启动子启
2009年04期 v.10 31-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 512K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：48 ] - 李浩杰;蒲晓斌;张锦芳;蒋俊;蒋梁材;
<正>1材料与方法1.1 材料与培养基以甘蓝型油菜NER为试材,分别于2006年9月、2007年9月、2008年9月种植于四川省农科院郫县农场。提取液(B5):B5大量(KNO32500mg/L+MgSO4250mg/L+
2009年04期 v.10 37-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K] [下载次数：178 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：84 ] - 郭丽红;王定康;袁燕;刘开庆;陈雪;陈善娜;
<正>1材料与方法1.1材料大肠杆菌Escherichia coli M15(pQE32/His6-HSF1,pREP4)和大肠杆菌E.coli TG1(PQE30空载体)。1.2HSF1的诱导表达分别接种Escherichia coli M15(pQE32/His6-HSF1,pREP4)和E.coli TG1(PQE30空载体)于
2009年04期 v.10 41-42+145页 [查看摘要][在线阅读][下载 221K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：41 ] - 周瑞金;杜国强;师校欣;
近年来,苹果遗传转化研究取得了较大的进展,已有多种标记基因和目的基因成功转入苹果中并且得到稳定表达和遗传。农杆菌介导法是苹果上应用的主要转化方法,叶片再生不定芽途径是被广泛应用的受体系统。影响农杆菌介导成功与否的因素很多,文章从以下几方面综述了目前的有关研究成果:①转化方法。因农杆菌介导法简便、高效,应用最广泛。但在转化结束后除菌不彻底易造成假阳性植株,应用直接转化法可以减少假阳性植株,提高转化率。发展苹果直接转化法,一方面需要深入研究原生质体培养,另一方面可以选用不需要原生质体制备和再生的方法,如基因枪法。②叶片再生能力。影响叶片高效再生因素包括试材的基因型,基本培养基类型,培养基中植物生长调节物质的种类及配比,光照条件和接种前叶片的生理生化状态(包括苗龄、叶片成熟度、叶片不同部位以及外植体的来源等),其中试材基因型是最重要的因子。③菌株类型。应根据不同的受体基因型选择不同的菌株类型。④农杆菌侵染条件。繁殖速度快的菌株侵菌时间宜短,繁殖速度较慢的菌株可适当延长侵菌时间。对农杆菌敏感的植株,可采用较低的OD值和较短的浸泡时间。一般菌液浓度范围是OD600=0.05～0.70,侵染时间不超过30min;共培养时间必须长于16h,但要以不对叶片造成伤害又最大限度提高转化效率为标准;植物酚类化合物乙酰丁香酮(AS)、渗透保护剂磷酸甜菜碱(BP)能提高农杆菌的毒力,从而提高其侵染能力。最后,指出目前依然存在转化效率不高、外源基因表达强度不够、对转化植株的选择不够重视等诸多问题。
2009年04期 v.10 43-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K] [下载次数：385 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：62 ] - 徐玲;胡娜;刘仁荣;裘雪梅;
<正>核仁小分子RNA(snoRNA)分为box C/D snoRNA,box H/ACA snoRNA和MRP RNA3类,前2类以数量繁多,基因组织形式复杂,功能多样而成为snoRNA的主要研究对象。笔者综合运用生物信息学方法,在拟南芥基因组中发现了一个新的box C/D snoRNA-AthZ270,对其序列结构、基因组织形式和功能进行了分析。
2009年04期 v.10 47-49+153页 [查看摘要][在线阅读][下载 303K] [下载次数：80 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：50 ] - 兰小平;郭宪;陈永昌;鄢珣;崔泰保;
<正>1材料与方法1.1 材料共采集血样103份,其中,44份河曲藏獒(HTM),42份青海藏獒(QTM),5份青海藏狮犬(QTS)以及12份青海土种犬(NAD)。均采集后肢静脉肝素钠抗凝血5～10 ml,24 h内带回实验室,处理后置低温冰箱( -40℃)冻存备用。
2009年04期 v.10 50-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K] [下载次数：48 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：42 ] - 沈童伟;陆徐忠;刘勋辉;李莉;杨剑波;
<正>1材料与方法1.1材料选取我国主要推广的16个玉米杂交组合及其双亲以及主要杂种优势群中的202个骨干自交系,其中185份自交系为中国玉米核心种质材料。种子严格隔离保纯,纯度99.9%以上。种子30℃发苗取其部分叶片提取DNA。
2009年04期 v.10 55-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 651K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：62 ] - 向倩;周兰英;万静;张旭;雷宝盛;金银春;冯毅;于绪任;赵晓英;
<正>1材料与方法1.1材料采自我国西南10个地区的麻疯树野生居群的枝条扦插(表1),摘取幼叶用于提取总DNA。表1麻疯树各样本的名称及来源
2009年04期 v.10 61-64+74页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：57 ] - 秦莹;张永宏;刘同欣;马倩;朱银莉;孙博兴;赵志辉;张嘉保;高妍;
<正>1材料与方法1.1材料松辽黑猪×野猪杂交猪(含野猪血缘50%)组织样品采自吉林省农业科学院畜牧分院,采集的皮下脂肪、腹脂、乳腺、背最长肌、臂三头肌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、回肠、十二指肠共计12种组织样品迅速置于液氮中,实验室-80℃保存。
2009年04期 v.10 65-67+71页 [查看摘要][在线阅读][下载 386K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：67 ] - 吴文忠;钱建共;陈玲;孙伟;
<正>1材料与方法1.1试验材料与DNA提取2007年,在江苏省苏州市种羊场随机选取成年羊88只,采取耳组织提取DNA,-20℃保存。并记录湖羊的初生重、断奶重和6月龄重。1.2湖羊微卫星标记的引物合成选择在第2号染色体上与
2009年04期 v.10 68-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K] [下载次数：50 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：47 ] - 李珺;马力通;姚新灵;
<正>1材料与方法1.1材料马铃薯品系:郑1011。受体菌:大肠杆菌BL21。载体质粒pCambia1305-1购自TaKaRa公司;反转录试剂、Taq DNA聚合酶、T4DNA连接酶、限制性内切酶购自TaKaRa公司;DNA回收试剂盒Wizard PCR preps DNA Purification System购自Promega公司。
2009年04期 v.10 72-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 274K] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：70 ] - 易春华;潘杰;付薇;颜健华;徐贤坤;熊毅;
<正>1材料与方法1.1病毒来源鹅副粘病毒分离株GX1株由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心实验室分离保存。1.2试剂及仪器各种PCR反应试剂、PMD-18T载体、胶回收试剂盒、限制性内切酶等均购自宝生物工程(大连)公司。仪器:恒温孵化箱、PCR反应仪、超速离心机、移液器等。
2009年04期 v.10 75-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：70 ] - 徐升胜;李兵;许西奎;沈卫德;
<正>1材料与方法1.1材料家蚕为该实验室保存的"大造"品系,25℃桑叶育,羽化后2h内收集家蚕蛾于-70℃保存备用。1.2家蚕副肌球蛋白(PM)和小副肌球蛋白(mPM)cDNA的克隆
2009年04期 v.10 79-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：70 ] - 何远清;马晓珂;张春霞;
<正>1材料与方法1.1材料10只海门山羊母羊血样采自海门山羊保种基地(江苏省南通市);10只安徽白山羊母羊血样采自安徽省芜湖市。颈静脉采血,所采血样均为10ml/只,用ACD抗凝,-20℃冻存。用酚氯仿抽提法提取基因组DNA,溶于TE,4℃保存。
2009年04期 v.10 83-86+90页 [查看摘要][在线阅读][下载 715K] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：54 ] - 张艳;郑心力;王峰;孙瑞萍;谭树义;
<正>1材料与方法1.1材料随机采集五指山猪品种耳组织样共30份,将其迅速放入液氮带回实验室,-70℃保存备用。1.2试剂RT-PCRKit、PCR产物纯化回收试剂盒、重组质粒抽提试剂盒,均购自天根生物工程有限公司;SalⅠ、BamHⅠ、
2009年04期 v.10 87-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K] [下载次数：75 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：78 ] - 张弢;
<正>1材料与方法1.1材料与试剂试材为"中花"芥蓝,种子播于装有蛭石和珍珠岩各半的苗钵中,并在玻璃温室中生长。幼苗期取幼嫩叶片,用75%的酒精棉擦洗干净,做好标记,立即投入液氮中固定,-75℃保存备用。
2009年04期 v.10 91-95+104页 [查看摘要][在线阅读][下载 1418K] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：39 ] - 金华;安晓雯;姜国斌;
<正>1材料与方法1.1植物材料采摘自然生长于黑龙江省安达市(119°28′E,44°1′N)盐碱地的羊草叶片,-70℃冰箱保存。1.2总RNA的分离与cDNA文库的构建用液氮研磨叶片
2009年04期 v.10 96-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 939K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：55 ] - 曲凌云;田黎;孙修勤;
<正>1材料与方法1.1菌株试验鉴定的青霉菌由海洋一所分离保存,见表1。1.2培养基固体培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),马铃薯浸汁1000ml,葡萄糖20g,琼脂20g。液体培养基:为该实验室改良,马铃薯浸汁200ml,蛋白胨2g,酵母粉1g,葡萄糖
2009年04期 v.10 101-104页 [查看摘要][在线阅读][下载 267K] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：46 ] - 曹素芳;李明;王岩;朱赞梅;刘长斗;唐桂芬;肖松云;
<正>1材料与方法1.1材料限制性核酸内切酶HindⅢ、BamHI、PvuⅡ、SspI、质粒抽提试剂盒、EcoT14 DNA Marker购自TakaRa公司。T4DNA连接酶购于promega公司。大肠杆菌DH5α菌株由该实验室保
2009年04期 v.10 171-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 353K] [下载次数：42 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：54 ]
- 杨震;彭选明;彭伟正;庞爱军;庞伯良;
2个两系不育水稻品种种子(株1S、陆18S)经"实践八号"育种卫星搭载,返回地面种植,并与60Co-γ单独和60Co-γ与卫星搭载复合诱变处理进行比较。研究结果表明:卫星搭载对当代两系不育水稻农艺性状有刺激作用;2个两系不育水稻品种对卫星搭载处理辐射敏感性均为不敏感;M2代突变频率均为SP+γ>γ>SP,并从中筛选出一批优良变异单株。同时对M2代中筛选出的特殊变异株进行了保护酶活性等生理指标的测定,以探求太空环境对两系不育水稻生物学效应的生理生化基础。结果表明卫星搭载诱变处理水稻种子是一种切实可行的育种新途径。
2009年04期 v.10 105-107+174页 [查看摘要][在线阅读][下载 460K] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：48 ] - 张凤英;刘志萍;包海柱;
<正>1材料与方法1.1雄性不育材料利用该课题组的4份大麦雄性不育育种材料2001-17、2001-37、2001-84、2001-116,自2005年起有针对性的进行杂交组配,对其后代进行育性观察。1.2方法实施温度因素在内的3种播期研究设计,即雄性不
2009年04期 v.10 108-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K] [下载次数：52 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：36 ] - 唐海明;汤文光;肖小平;杨光立;
<正>1材料与方法1.1试验设计试验于2007年在湖南省土壤肥料研究所试验基地进行,供试品种为中糯304,土壤为第四纪红色粘土发育的红壤,pH值为6.7,有机质含量3.68g/kg,速效氮122.35mg/kg,有效磷2.78mg/kg,速效钾128.64mg/kg。
2009年04期 v.10 112-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 440K] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：58 ] - 朱春来;
<正>1材料与方法1.1研究区概况研究区位于青海省东部的乐都县,处于黄土高原与青藏高原过渡地带,是典型的干旱山区,耕地多为脑山地和浅山地,川水地面积仅占总耕地面积的4.9%。研究地点为乐都县引胜乡杨家山村,属于典型的黄土高原陡坡地退耕还林区,
2009年04期 v.10 117-119+124页 [查看摘要][在线阅读][下载 369K] [下载次数：32 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：49 ] - 张淑卿;李剑峰;师尚礼;
[目的]了解苜蓿种子形成过程中根瘤菌在植株各部位的动态分布,探明苜蓿种子内生根瘤菌的携带机理。[方法]取不同生育时期两个品种苜蓿植株的根、茎、叶、花、荚果、种子等部位,表面消毒后以稀释平板法对根瘤菌在苜蓿植株内的存在部位与数量变化进行研究。[结果]植株地下部分同时期根瘤菌数量比较:主根<侧根<毛根;不同时期主根和毛根根瘤菌数量:结荚期>分枝期>花期,侧根根瘤菌数量:分枝期>花期>结荚期;植株地上部分内生根瘤菌分布:茎部仅在分枝期和结荚期携带有少量根瘤菌(分别为155cfu/g,125cfu/g);分枝期内主要存在于花芽(9400cfu/g);现蕾期仅存在于子房壁组织(18cfu/5朵花蕾);花期少量存在于花粉(26cfu/5朵花)、受精胚珠(26cfu/50粒种子)、花托(15cfu/5朵花)和子房壁内(95cfu/5朵花);结荚期存在于荚果皮(3550cfu/5荚果)及幼嫩种子中(1135cfu/50粒);成熟种子的种皮内有大量分布(1435cfu/50粒),种胚及子叶内仅有少量分布(32cfu/50粒,22cfu/50粒)。[结论]内生根瘤菌在苜蓿植株地上部分各部位的分布有较大差异,且仅存在于与种子形成直接相关的部位。
2009年04期 v.10 120-124页 [查看摘要][在线阅读][下载 321K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：74 ] - 王克臣;冷超;黄文功;李明;
<正>黑龙江省农业科学院经济作物研究所利用外源DNA导入技术,采用柱头基部切割滴注法以法国品种范妮(FANY)为供体,黑亚10号为受体育成了品系D93005-15-8,其各产量性状均超过其受体亲本和当前的主栽品种,2003年由黑龙江省品种审定委员会审定通过,命名为黑亚14号(H14)。
2009年04期 v.10 125-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 649K] [下载次数：75 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：43 ] - 闫宏山;
<正>1材料与方法1.1育种材料及其特点2003年笔者在杂交组合"小黄谷三万×安5012"后代材料中发现2个株系,其穗短粗,直立,穗柄较粗,上部叶片挺拔上冲,中下部叶片随叶位的降低逐渐增大与茎的夹角,且叶色深绿,较符合谷子理想株型形态特征。其中一个株系幼苗鞘色为绿色,另一个为紫色,分别命名为"立绿谷"和
2009年04期 v.10 154-158页 [查看摘要][在线阅读][下载 487K] [下载次数：113 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：45 ] - 谭宏伟;周柳强;谢如林;黄美福;
<正>1材料与方法1.1试验概况选择有代表性的甘蔗种植区广西壮族自治区来宾市进行田间试验,供试甘蔗品种为"台糖22",种植密度45000芽段/hm2。各生长阶段降雨观测在田间试验旁进行,试验地养分测定按常规方法。
2009年04期 v.10 175-177+182页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：60 ]